緩沖溶液是指由弱酸及其共軛堿（或弱堿及其共軛酸）所組成的緩沖對配制的，且能夠在加入少量強酸或強堿時(shí)，可以有效減緩pH值改變的水溶液。緩沖溶液能幫助維持分析方法的穩定，而不會(huì )因為微弱的環(huán)境改變的情況下而造成分析結果的改變。

緩沖溶液是被用來(lái)維持pH值的穩定。它們是通過(guò)維持弱酸及其共軛堿的平衡從而防止了pH值的改變。

• 在配制緩沖液前，建議用定值校準緩沖液標準品來(lái)校對電子pH計

• 根據所需緩沖液的濃度，精確地稱(chēng)出所需緩沖鹽的重量

• 把所需的緩沖鹽加到已經(jīng)裝有HPLC色譜級超純水的容量燒瓶中，并充分攪拌至*溶解

• 使用pH探針或pH計去測量溶液的pH值

• 通過(guò)添加少量的強酸或強堿，將容液的pH值調整至所需的值

• 調整至所需pH值后，將溶液用色譜級超純水稀釋至最終的所需體積容量，并混合均勻

HPLC緩沖液通常用于控制在液相色譜分析中所不希望出現的二次相互作用。此外，緩沖液也被用來(lái)工作分析物的電離狀態(tài)，以確保分析物不會(huì )同時(shí)出現一個(gè)以上的電離狀態(tài)。

化合物的pKa值代表此化合物的50%離子化和50%中性時(shí)的pH值。如果在此pH值下分析此化合物，你會(huì )看到分裂峰的出現或者不穩定的保留時(shí)間。因此，我們建議所有的分析方法的pH值都應該控制在目標分析化合物的pKa值正負兩個(gè)pH單位以上。

當配制等度流動(dòng)相的時(shí)候，我們

還需要考慮以下幾個(gè)因素來(lái)確保方法的穩定

• 盡可能提前預混合你所使用的流動(dòng)相，因為這將防止經(jīng)過(guò)泵混合流動(dòng)相時(shí)會(huì )出現的錯誤

• 每一次都需要始終使用相同的配制方法及流程。例如，如果你方法是先加水，那你每次都必須是先加水。如果你是先測定單獨的成分然后再混合，那你就必須每次都按這個(gè)流程來(lái)做。記得千萬(wàn)不要改變這一個(gè)固定的配制流程，因為這個(gè)配制流程的改變讓分析物的保留時(shí)間可能出現很大的改變

以下的這個(gè)實(shí)驗例子展示了當流動(dòng)相

用以下不同的方式來(lái)混合時(shí)，

峰保留時(shí)間可能出現的改變